HyperPlus提供片段化 + 文库制备的解决方案

KAPA HyperPlus试剂盒包含低偏向性的酶切片段化DNA的模块，可以取代设备昂贵、难以自动化的机械打断DNA的方法。

• 通过更少的酶促反应及纯化步骤实现更短的实验流程及更少的手动操作步骤• KAPA RNA HyperPrep 可以作为一个单独的工作流程使用，也可以跟mRNA捕获或者
• 从起始RNA到可用于上机测序的链特异性文库只需4小时即可实现 核糖体去除(HRM)模块联合使用
• 实现整个工作流程(包括mRNA捕获或核糖体去除)，可以在一个工作日内完成
• 可在自动化平台上实现高通量并稳定可靠

DNA片段大小可调整，片段化结果可重复性高

• 通过调整片段化酶切时间，文库插入片段大小可控制在150-800 bp之间
• 不同GC含量的DNA和不同的DNA起始量，都可以得到一致大小的插入片段

不同DNA起始量，得到一致的文库片段大小分布

KAPA HyperPlus kit整合了可控的酶切片段化过程。10 ng、100 ng 人基因组DNA在37℃进行酶切打断，时间15 min、30 min。文库片段大小不受样本起始量的影响，且重复性很高。图中样本文库扩增和磁珠纯化后，采用Agilent High Sensitivity DNA Assay检测。

不同物种、不同GC含量在相同酶切条件下产生一致大小的插入片段

该图比较了在相同打断时间条件下，不同物种、不同起始DNA量、不同GC%的样本打断片段长度分布的一致性。打断时间：5 min、15 min、45 min；平均片段长度：700 bp、 350 bp、 200 bp；检测仪器: Bioanalyzer 2100；试剂: High-Sensitivity DNA Assay(Agilent Technologies)
KAPA HyperPlus kit 拥有更高的转化率及更低的重复率。

行业领先的文库得率

文库转化率(conversion rate)是指起始DNA分子转化为连接了接头，可以被测序的文库分子(library molecule)的百分比(%)。它是文库构建的重要评价指标，将最终决定文库的构建质量和多样性。

• DNA起始量≥100 ng时，文库转化率均可达到>80%
• 面对一系列不同质量的DNA输入都有极佳的表现，低起始量样本不必采取特殊工作流程或特殊试剂
• 高文库产出率，可允许进行DNA起始量低至50 ng的无PCR扩增(PCR-free)文库制备流程

市售文库构建产品的文库转化率表现参差

KAPA HyperPlus 文库构建试剂可获得卓越的转化率。转化率(起始DNA分子转化成可测序文库分子的比例)是评估文库构建效率及文库多样性的指标。基于连接方法的文库构建效率会随着起始样本量的降低而降低。在平行比较中，KAPA HyperPlus试剂盒有更高的转化效率(1ng-1ug)。在100 ng起始DNA的情况下，依然可达90%的转化效率，因而可完成低起始量样本的PCR-Free工作流程。数据源于多次实验。

保证优越的测序结果

• 高转化率，使得扩增循环数减少，从而减少由扩增带来的重复率(duplication rate)
• 更高的文库多样性，更均一的测序覆盖度，使得低频突变(low-freqency mutation)的检出可信度更高

更低的重复率

KAPA HyperPlus kit及KAPA Hyper Prep+Covaris 机械打断方法案可以获得更高的文库多样性，降低重复率，从而获得更高的序列覆盖深度，有助于检测出更多的SNP位点，图中试验的捕获采用SeqCap EZ HGSC VSRome Panel

更高的SNP被检出敏感度

50 ng人基因组DNA，采用KAPA HyperPlus、KAPA HyperPrep+Covaris机械打断、I厂家 Rapid Capture Exome Kit进行文库构建，用SeqCap EZ HGSC VC Romeexome panel进行捕获。测序：IlluminaHiSeq 2500，2*100bp。

更高的覆盖一致性

采用Bedtools对于测序数据(平均每个技术重复产生27 million reads)进行序列覆盖度计算。HyperPlus结果与机械打断+HyperPrep结果类似，优于I厂家文库。I厂家文库存在低覆盖区域及高覆盖区域。

序列覆盖偏好性低

• 与tagmentation和其他酶切片段化DNA的方法相比，HyperPlus酶切模块的序列偏好性更低
• 与机械方法打断DNA的性能相当
• 由于其非常低的序列偏好性，使得测序覆盖度更均一，进而降低测序成本

GC偏好性比较

KAPA HyperPlus文库构建试剂盒在微生物全基因组文库构建中可获得卓越的覆盖均一性及更低的GC偏好。针对3种GC含量不同的细菌，采用1nggDNA进行文库构建，文库构建试剂：KAPA HyperPrep Kit+机械打断、KAPA HyperPlus kit、N厂家dsDNA Fragmentase、N厂家Ultra DNA Library Prep kitfor illumina、I厂家XT DNA library prep kit(Illumina)。测序: Illumina MiSeq，2*300bp。GC偏差比较图(Picard软件进行分析)。灰色柱状图描述基因组GC分布，每100bp基因组进行GC含量计算。GC偏差通过在每100bp基因组上的均一化覆盖度来进行评估。如果所有的反应步骤(片段化、接头连接、文库扩增、簇扩增、测序、数据分析)均无偏差，那么均一化覆盖度应该是一条直线，且等于1。在不同GC%的物种中，可以看到KAPA HyperPlus、KAPA HyperPrep+机械打断结果较好，远远优于竞品试剂盒结果。